高效液相色谱仪应用
南京科捷分析仪器有限公司专业生产、提供销售气相色谱仪，液相色谱仪，色谱配套产品，色谱配件。
例1．稠环芳烃分析（环境气体分析）
样 品：含六苯并苯等8种稠环芳烃的混合物
色谱仪：“南京科捷LC600”液相色谱仪，配有色谱工作站
检测器：UV紫外检测器，340nm
色谱柱：C18键合相（ODS-224）,5μm，柱长25cm，柱径4.6mm
流动相：甲醇-二氯甲烷（8:2）混合溶剂
流 速：1mL/min
进 样：20μL
结 果：所有组分在25min之内全部流出，各组分完全分离，组分出峰顺序为：六苯并苯，二苯二萘嵌苯，三苯二萘嵌苯，苯萘并二萘嵌苯，四苯二萘嵌苯，萘六苯并苯，二苯萘并二萘嵌苯，苯菲并五苯。
例2．磺胺分析（药物分析）
样 品：磺胺、磺胺嘧啶、磺胺甲基异噁唑和甲氧苄氨嘧啶的混合物
色谱仪：“南京科捷LC600”液相色谱仪，740色谱数据处理机
检测器：UV 481型紫外检测器，波长240nm
色谱柱：μ-Bondapak C18 , 5μm，柱长25 cm，柱径4.6 mm
流动相：由KH2PO4（0.05mol/L）和Na2HPO4（0.05 mol/L）以及MeOH所组成，其用量比例为200:10:165，
流 速：1mL/min
进 样：10μL
结 果：所有组分在6min之内全部流出，各组分完全分离，组分出峰顺序为：磺胺保留时间为2.60 min, 磺胺嘧啶保留时间为3.18 min、磺胺甲基异噁唑保留时间为4.33 min,甲氧苄氨嘧啶保留时间为5.19min。
例3．银杏内酯分析（药物分析）
样 品：含银杏苦内酯等4种物质的混合物
色谱仪：“南京科捷LC600”液相色谱仪
配有570自动进样器，Rheadyane 77251进样阀，HP化学工作站
检测器：500型ELSD Alltech 蒸发光散射检测器
漂移管温度为91℃，氮气流速为2.75L/min
色谱柱：Platinum OPS，5μm，柱长25cm，柱径4.6mm
流动相：水:甲醇:四氢呋喃 = 75:20:10
流 速：1mL/min
进 样：10μL
结 果：所有组分在15min之内全部流出，各组分完全分离，组分流出顺序为：峰1为银杏苦内酯C, 峰2为白果内酯, 峰3银杏苦内酯A, 峰4为银杏苦内酯B。
例4．脂肪酸甲酯分析（药物分析）
样 品：含5种脂肪酸甲酯的混合物
色谱仪：“南京科捷LC600”液相色谱仪，配有色谱工作站
检测器：500型ELSD Alltech 蒸发光散射检测器
漂移管温度为45℃，氮气流速为1.5L/min
色谱柱：Silver Impregnated Ion-Exchange ,柱长25cm，柱径4.6mm
流动相：乙腈:甲醇 = 2:98
流 速：0.75mL/min
进 样：10μL
结 果：所有组分在10min之内全部流出，各组分完全分离，组分流出顺序为：峰1为C18：0脂肪酸甲酯，峰为C18：1脂肪酸甲酯，峰3为C18：2脂肪酸甲酯，峰4为C18：3脂肪酸甲酯，峰1为C20：4脂肪酸甲酯。
例5．茶碱分析（茶叶）
样 品：含茶碱等三种物质的混合物
色谱仪：“南京科捷LC600”液相色谱仪，配有色谱工作站
检测器：UV紫外检测器，280nm
色谱柱：Micro μBondapak C18 ，8μm，柱长25 cm，柱径4.6 mm
流动相：二甲基二酰胺:甲醇:醋酸:水 = 23.5:1:0.5:75（v/v）
流 速：1mL/min
进 样：10μL
结 果：所有组分8min之内全部流出，各组分完全分离，组分流出顺序为：峰1为可可碱，峰2为茶碱，峰3为咖啡碱。
例6．脂肪酸直接分析
样 品：未经衍生处理的亚麻酸等6组分的混合物
色谱仪：“南京科捷LC600”液相色谱仪，四元梯度泵，色谱工作站
检测器：500型ELSD Alltech 蒸发光散射检测器
漂移管温度为65℃，氮气流速为2.0L/min
色谱柱：AlltimaTM C18 ，5μm，柱长25cm，柱径2.1mm
流动相：A为水，B为乙腈
梯 度 时间 0min 10min 15min 20min
A 13% 20% 20% 5%
B 77% 80% 80% 95%
流 速：0.4mL/min
进 样：20μL
结 果：所有组分20min之内全部流出，各组分完全分离，组分流出顺序为：峰1为亚麻酸，峰2为肉豆蔻酸，峰3为亚油酸，峰4为棕榈酸，峰5为油酸，峰6为硬脂酸。
例7：氨基酸衍生物分析（食品分析）
样 品：22种氨基酸的苯基乙酰硫脲混合物
色谱仪：“南京科捷LC600”液相色谱仪，梯度洗脱装置，色谱工作站
检测器：UV紫外检测器，波长254nm
色谱柱：柱长25cm，柱径0.46cm Zorbax ODS柱（Dupont）
流动相：A液为0.01mol/L的NaAc, pH =4.5
B液为CH3CN
梯 度：0min～6min B/A = 24/76～42/58（v/v）
6min～14min B/A = 42/58（v/v）
14min～20min B/A = 24/76（v/v）
流 速：1mL/min
进 样：自动进样器进样10μL
结 果：所有组分在20min之内全部流出，各组分完全分离，组分出峰顺序为：峰1为ASP，峰2为GLU，峰3为ASN，峰4为SER，峰5为GLN，峰6为THR，峰7为GLY，峰8为MET·SO2 ,峰9为HYP, 峰10为ALA，峰11为TYR，峰12为HIS，峰13为CYS（CH2），峰14为VAL，峰15为MET，峰16为PRO，峰17为TRP，峰18为LYS，峰19为PHE，峰20为ILE，峰21为LEU，峰22为ARG。
例8．氨基酸直接分析
样 品：12种未衍生氨基酸混合物溶液（1mMol/L）
色谱仪：“南京科捷LC600”液相色谱仪，四元梯度泵
配有二极管阵列检测器、蒸发光散射检测器和化学工作站
检测器：500型ELSD蒸发光散射检测器
漂移管温度为95℃，氮气流速2.5L/min
色谱柱：Alltima C18 , 5μm，柱长25cm，柱径4.6mm
流动相：A为含0.1% TFA的水
B为含0.1% TFA的乙腈
梯 度: 时间 0min 5min 20min
A液 100% 100% 60%
B液 0% 0% 40%
流 速：0.6mL/min
进 样：20μL
结 果：所有组分在25min之内全部流出，各组分完全分离，组分流出顺序为：峰1为丝氨酸，峰2为赖氨酸，峰3为谷氨酸，峰4为精氨酸，峰5为脯氨酸，峰6为缬氨酸，峰7为甲硫氨酸，峰8为酪氨酸，峰9为异亮氨酸，峰10为亮氨酸，峰11为苯丙氨酸，峰12为组氨酸。
例9．糖类分析（食品分析）
样 品：含果糖等6种糖类物质的混合物
色谱仪：“南京科捷LC600”液相色谱仪，四元梯度泵，色谱工作站
检测器：Mark ⅡA型ELSD Alltech 蒸发光散射检测器
漂移管温度为100℃，氮气流速为2.2L/min。
色谱柱：Absorbosphere, NH2 ，柱长25cm，柱径4.6mm
流动相：A为乙腈，B为水
梯 度：时间 0min 20min
A 85% 75%
B 15% 25%
流 速：1.5mL/min
进 样：20μL
结 果：所有组分在24min之内全部流出，各组分完全分离，组分流出顺序依次为：峰1为果糖，峰2为葡萄糖，峰3为蔗糖，峰4为麦芽糖，峰5为乳糖，峰6为棉籽糖。
例10．嘌呤分析（药物分析）
样 品：取1mL血浆加入200μL的1.98mol/L的高氯酸（GR），再加入600μL蒸馏水和200μL的1.47mol/L的别嘌呤醇（内标），用旋转混合器振摇10s于1200g离心10min，取上层清液备分析用。
色谱仪：“南京科捷LC600”液相色谱仪，配有色谱工作站
检测器：UV紫外检测器，254nm
色谱柱：μBondapsk C18 ，10μm，柱长30cm，柱径3.9mm
流动相：0.02mol/L的磷酸二氢钾，pH = 2.2
流 速：2.0mL/min
进 样：10μL
结 果：所有组分在12min之内全部流出，各组分分离完全，保留时间依次为：尿嘌呤为3.18min（峰1），腺嘌呤为3.21 min（峰2），次黄嘌呤为3.90 min（峰3），5-羟基吡嗪酸为4.75min（峰4），5-羟基吡嗪胺为5.31 min（峰5），黄嘌呤为5.90 min（峰6），吡嗪酸为7.35min（峰7），内标别嘌呤醇为8.53min（峰8），吡嗪胺为9.57min（峰9）。
例11．植物甾醇分析（生物制药）
样 品：含β-谷甾醇、豆甾醇、菜油甾醇、菜籽甾醇和胆固醇的混合物
色谱仪：“南京科捷LC600”液相色谱仪，配有色谱工作站
检测器：Alltech 2000型 ELSD蒸发光散射检测器
漂移管温度为
色谱柱：Supecol Discouery C18 , 5μm，柱长25cm ，柱径4.6mm
流动相：甲醇
流 速：1mL/min
进 样：10μL
结 果：所有组分在19min之内全部流出，各组分完全分离，组分流出顺序为：峰1为菜籽甾醇保留时间13.70min，峰2为胆固醇保留时间14.62 min，峰3为豆甾醇保留时间15.45min，峰4为菜油甾醇保留时间15.97min，峰5为β-谷甾醇保留时间17.05min。
例12．甾族化合物分析
样 品：含孕酮等4种物质的混合物
色谱仪：“南京科捷LC600”液相色谱仪，四元梯度泵，色谱工作站
检测器：Mark ⅡA型ELSD Alltech 蒸发光散射检测器
漂移管温度为135℃，氮气流速为1.2L/min。
色谱柱：Hyperil C18 ,5μm，柱长25cm，柱径4.6mm
流动相：甲醇:水 = 70:30
流 速：1.2mL/min
进 样：20μL
结 果：所有组分在12min之内全部流出，各组分完全分离，组分流出顺序为：峰1为氢化可的松，峰2 为强的松，峰3为睾酮，峰4为孕酮。
例13．皮质醇分析
样 品：含皮质醇等5种物质的混合物
色谱仪：“南京科捷LC600”液相色谱仪，配有色谱工作站
检测器：荧光检测器，流动池30μL
激发波长370nm ,检测波长480nm，狭缝均为20nm
色谱柱：Finepak C18 ，10μm，柱长25cm，柱径4.6mm
流动相：甲醇:水 = 50:100（v/v）
流 速：0.8 mL/min
进 样：20μL
结 果：所有组分70min之内全部流出，各组分完全分离，组分流出顺序为：峰1为皮质醇保留时间15.8min，峰2为β-Methasone保留时间20.0min，峰3为四氢皮质酮保留时间22.5min，峰4为四反皮质醇保留时间32.5 min，峰5为四氢-11-脱氧皮质醇保留时间65.8min。
例14．胆固醇分析
样 品：含胆固醇等6组分的混合物
色谱仪：“南京科捷LC600”液相色谱仪，配有色谱工作站
检测器：ELSD美国Alltech MKⅢ蒸发激光散射检测器
漂移管温度为65℃，氮气流速为2.0L/min。
色谱柱：Allsphere Silica ，3μm，柱长10cm，柱径4.6mm
流动相：A为离子对试剂，B为正己烷，C为水
梯 度：时间 0min 7min 15min
A 58% 52% 52%
B 40% 40% 40%
C 2% 8% 8%
流 速：1.25mL/min
进 样：20μL
结 果：所有组分在13min之内全部流出，各组分完全分离，组分流出顺序为：峰1为胆固醇，峰2为棕榈酸，峰3为磷脂酰乙醇胺，峰4为磷脂酰丝氨酸，峰5为磷脂酰胆碱，峰6为神经鞘磷脂。
例15．磷脂分析（生物）
样 品：含磷脂酰肌醇等4种物质混合物
色谱仪：“南京科捷LC600”液相色谱仪，四元梯度泵，色谱工作站
检测器：500型ELSD Alltech 蒸发光散射检测器
漂移管温度为120℃，氮气流速为2.7L/min。
色谱柱：Rosil NH2 ，5μm，柱长15cm，柱径4.6mm
流动相：A为无水乙醇，B为0.2mol/L的草酸溶液
梯 度：时间 0min 15min 30min 30.1min 35.1min
A 95% 85% 85% 95% 95%
B 5% 15% 15% 5% 5%
流 速：1.5mL/min
进 样：10μL
结 果：所有组分在35min之内全部流出，各组分完全分离，组分流出顺序为：峰1为磷脂酰乙醇胺, 峰2为磷脂酰丝氨酸, 峰3为磷脂酰胆碱, 峰4为磷脂酰肌醇。
例16．多肽分析（生物）
样 品：含G-Y等3种多肽物质的混合物
色谱仪：“南京科捷LC600”液相色谱仪，配有色谱工作站
检测器：ELSD美国Alltech MKⅢ蒸发激光散射检测器
漂移管温度为110℃，氮气流速为2.19L/min
色谱柱：AlltimaTM C18 ，5μm，柱长25cm，柱径4.6mm
流动相：0.05%TFA水溶液:乙腈 = 65:35
流 速：0.6mL/min
进 样：20μL
结 果：所有组分在5min之内全部流出，各组分完全分离，组分流出顺序为：峰1为G-Y，峰2为G-L-Y，峰3为K-D。
例17．维生素分析（食品分析）
样 品：含维生素A等5种物质的混合物
色谱仪：“南京科捷LC600”液相色谱仪，配有工作站
检测器：500型ELSD Alltech 蒸发光散射检测器
漂移管温度为70℃，氮气流速为2.0L/min
色谱柱：Adsorbosphere C18 ，5μm，柱长25cm，柱径4.6mm
流动相：甲醇:乙醇 = 97:3
流 速：1mL/min
进 样：20μL
结 果：所有组分在21 min之内全部流出，各组分完全分离，组分流出顺序为：峰1为维生素A，峰2为维生素D2，峰3为维生素D3，峰4为维生素E，峰5为维生素K1 。
例18．抗菌素分析（药物）
样 品：含有红霉素等5种抗菌素的混合物
色谱仪：“南京科捷LC600”液相色谱仪
配有570自动进样器，Rheadyane 77251进样阀，HP化学工作站
检测器：2000型ELSD Alltech 蒸发光散射检测器
漂移管温度为95℃，氮气流速为2.0L/min
色谱柱：AlltimaTM C18 ,5μm，柱长15cm，柱径4.6mm
流动相：A为0.2% 五氟丙酸, B为甲醇
梯 度：时间 0min 5min
A/B 55%/45% 35%/65%
流 速：1mL/ min
进 样：10μL
结 果：所有组分在6min之内全部流出，各组分完全分离，组分流出顺序为：峰1为红霉素，峰2为链霉素，峰3为托布霉素，峰4为阿米卡星，峰5为新霉素。
例19．无活菌素分析（生物制药）
样 品：含无活菌素等5种物质的混合物
色谱仪：“南京科捷LC600”液相色谱仪
配有570自动进样器，Rheadyane 77251进样阀，HP化学工作站
检测器：2000型ELSD Alltech 蒸发光散射检测器
漂移管温度为96℃，氮气流速为2.9L/min
色谱柱：AlltimaTM C18 ,5μm，柱长25cm，柱径4.6mm
流动相：THF:水 = 60:40
流 速：1mL/min
进 样：20μL
结 果：所有组分在20min之内全部流出，各组分完全分离，组分流出顺序为：峰1为无活菌素，峰2为单活菌素，峰3为二活菌素，峰4为三活菌素，峰5为四活菌素。
例20．非离子型去垢剂分析（化学化工）
样 品：3种非离子型去垢剂物质的混合物
色谱仪：“南京科捷LC600”液相色谱仪，配有色谱工作站
检测器：2000型ELSD Alltech 蒸发光散射检测器
漂移管温度为65℃，氮气流速为1.9L/min
色谱柱：Alltech EconosphereTM C18 ,5μm，柱长15cm，柱径4.6mm
流动相：甲醇:水 = 90:10
流 速：0.8mL/min
进 样：20μL
结 果：所有组分在5 min之内全部流出，各组分完全分离，组分流出顺序为：峰1为n-葵基-β-D-吡喃葡萄糖甙，峰2为n-十二烷基-β-D-吡喃葡萄糖甙，峰3为n-辛葵基-β-D-吡喃葡萄糖甙。
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